2019-2020学年新苏教版选修1 第四章 第二节 分子生物学技术 学案
2019-2020学年新苏教版选修1 第四章 第二节 分子生物学技术 学案第1页

  第二节 分子生物学技术

学习导航 明目标、知重点难点 尝试PCR(多聚酶链式反应)技术的基本操作。(重、难点)

体验PCR这一常规分子生物学实验方法。(难点)

理解PCR的原理,讨论PCR技术的应用。(重点)

   [学生用书P56])

  

  一、阅读教材P83分析使用PCR仪的安全措施

  1.严禁在PCR仪运行过程中打开池盖,否则会造成仪器的永久损坏。

  2.仪器运行时,样品池及池盖内表面温度较高,当心灼伤。

  3.仪器运行时,加热器内腔为高温、高压环境,严禁触及。

  4.仪器运行过程中如果发出尖锐的刺刮声音,请立刻停止运行,检查是否有微量离心管断裂等故障。

  5.仪器运行过程中如果没有反应,请切断电源,进行检查。

  6.必须保持样品池内部的清洁,可用蘸有体积分数为95%的酒精棉签擦拭相关部位。

  7.仪器必须放置在PCR实验室里,操作者在操作的时候必须遵循PCR实验室的相关规定,做好穿防护服、戴防护手套等相关防护措施。

  8.当仪器接通电源后,打开外壳或移走部件可能会造成人员伤害,因此,在进行任何调整、替换、保养或维修之前,请切断所有的电源。

  二、阅读教材P84完成多聚酶链式反应程序

  1.物质准备:向离心管中加入模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸以及TaqDNA聚合酶。

  2.变性:在 94 ℃高温下,作为模板的双链DNA解旋为单链DNA。

  3.退火(复性):反应体系的温度降至 55 ℃,引物与单链DNA上的特定部位相互配对。

  4.延伸:反应体系的温度回升到 72 ℃左右,按照单链DNA上的脱氧核苷酸序列,4种脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则,在TaqDNA聚合酶的作用下连接到引物之后,使引物链延伸,形成互补的DNA双链。

  三、阅读P85~87分析目的DNA片段的体外扩增与鉴定

  1.DNA片段的PCR扩增

  (1)准备器材:PCR仪、台式高速离心机、0.2 mL PCR微量离心管等。

(2)在0.2 mL PCR微量离心管中加入 5_μL_10倍浓缩的PCR缓冲液,4种脱氧核苷