课时1 DNA的粗提取与鉴定

一、实验目的：

　　初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。

二、实验原理：

1．DNA的溶解性：

思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？

思考题2：利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？

2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解 ，但对 没有影响。大多数蛋白质不能忍受 ℃的高温，而DNA在 ℃以上才会变性。 能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。

3．细胞在 中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。

4．DNA的鉴定：

思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？

三、实验材料：鸡血细胞液

思考题4：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？

四、实验步骤：

1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的 溶液，离心处理；

2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；

思考题5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？

3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；

4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；

思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？

5．滤取含DNA的黏稠物：过滤；

思考题7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？

6．将DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；

7．过滤含有DNA的氯化钠溶液：过滤；

思考题8：这一步骤的目的是什么？

思考题9：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？

8．提取含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌；

思考题10：这一步骤的目的是什么？

思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？