1．2　基因工程的基本操作程序

　　1．掌握目的基因获取的常见方法。(难点)　2.学会基因表达载体构建的方法和要求。(重、难点)　3．理解目的基因导入受体细胞的具体过程。(重点)　4.掌握目的基因检测与鉴定的具体操作。

　　一、目的基因的获取(阅读教材P8～P11)

　　.目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。

　　.目的基因的获取方法

　　(1)从基因文库中获取

　　①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。

　　②种类

　　③提取依据：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA，以及基因的表达产物蛋白质等特性。

　　(2)利用PCR技术扩增目的基因

　　①PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

　　②目的：短时间内大量扩增目的基因。

　　③原理：DNA双链复制。

　　④过程

　　第一步：加热至90～95 ℃，DNA解链；

　　第二步：冷却至55～60 ℃，引物结合到互补DNA链；

　　第三步：加热至70～75 ℃，热稳定DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。

　　如此重复循环多次。

　　⑤特点：指数形式扩增。

　　(3)人工合成

　　如果目的基因较小，核苷酸序列又已知，可通过DNA合成仪用化学方法人工合成。

　　二、基因表达载体的构建(阅读教材P11)

　　1．构建基因表达载体的目的

(1)使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。