2017-2018学年苏教版必修2 第四章 第一节 第2课时 提取和鉴定DNA 学案
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  第2课时 提取和鉴定DNA

  

  

  一、实验原理

  1.析出原理

  (1)DNA能溶解在NaCl溶液中,且溶解度随着NaCl浓度的变化而改变。

  (2)在NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。(如下图)

  

  2.DNA提纯原理:DNA不溶于乙醇溶液,而细胞中的某些物质能溶于乙醇溶液。

  3.鉴定原理:DNA遇二苯胺在沸水浴加热的条件下呈蓝色。

  二、实验器材与试剂

  1.实验材料:鸡血细胞。(以鸡血为例)

  2.试剂与仪器:2 mol/L的NaCl溶液、二苯胺试剂、蒸馏水、烧杯、试管、玻璃棒、纱布、体积分数为95%冷却的乙醇溶液、酒精灯、三脚架、石棉网等。

  三、实验方法与步骤

  1.制备鸡血细胞液

  (1)先配备10%的柠檬酸钠溶液,按180 mL新鲜鸡血混合100 mL 10%柠檬酸钠溶液的比例,立即将血液与柠檬酸钠充分混合,同时用玻璃棒搅拌以免凝血。

  (2)将充分混合的鸡血细胞液置于4 ℃冰箱内,静置一天,使血细胞自行沉淀后获得鸡血细胞液。

  2.粗提取鸡血的DNA

  (1)获取核物质:取5~10 mL鸡血细胞液注入50 mL烧杯中,加蒸馏水20 mL,用玻璃棒搅拌5 min,使血细胞过度吸水破裂,细胞核内物质释放出来,然后用纱布过滤取其滤液。

  (2)溶解DNA:取浓度为2_mol/L的NaCl溶液40 mL加入滤液中,用玻璃棒沿同一方向轻轻搅拌,使其混合均匀。

  (3)析出DNA丝状物:沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水,同时用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌。由于NaCl溶液浓度的下降,使得DNA溶解度下降,蛋白质溶解度上升,DNA析出成白色丝状物,当丝状物不再增加时,停止加入蒸馏水。

(4)滤取DNA丝状物:用多层纱布过滤,取纱布上 DNA的丝状物。