①概念:指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
②原理:
a.许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的pH下,这些基团会带上正电或负电。
b.在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
c.电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。
③方法:常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
3.缓冲溶液
(1)作用:在一定范围内,抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变。
(2)配制:由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成,通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
探讨:凝胶色谱法分离过程是怎样的?
提示:蛋白质混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→先收集大分子→后收集小分子。
探讨:凝胶的成分是什么?凝胶有何特点?
提示:成分:大多数是多糖类化合物构成的一些微小的多孔球体,如葡聚糖或琼脂糖。特点:小球体内部有许多贯穿的通道,可以分离不同相对分子质量的蛋白质。
1.蛋白质分离的依据
蛋白质各种特性的差异,如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等,可以用来分离不同种类的蛋白质。
2.蛋白质分子在凝胶中的运动情况分析
相对分子质量大 相对分子质量小