上，左手拔出棉塞　③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰　④用左手的拇指和食指完全打开皿盖　⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖　⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上

A．①③④⑤ B．④⑤⑥

C．③⑤ D．①②④⑥

答案　C

解析　琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃则会烫手，低于50 ℃时若不能及时操作，琼脂会凝固；无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基；等待平板冷却凝固(大约需5～10 min)后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。

特别提醒　　(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。

(2)倒平板的过程需要进行无菌操作，要对培养基进行高压蒸汽灭菌，对培养皿进行干热灭菌，在酒精灯火焰旁操作进行灼烧灭菌。

2．某学校开展大肠杆菌培养活动，首先对实验室进行清扫和消毒处理，然后准备各种原料和用具。请回答下列问题：

(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先需制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料：______________________________________________________

________________________________________________________________________。

(2)微生物在生长过程中对各种成分需求量不同，配制培养基时各成分要有合适的________。在烧杯中加入琼脂后要不停________，防止______________________。

(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入______________中灭菌。灭菌完毕后拔掉电源，待压力表的压力自然降到 0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应____________。

答案　(1)牛肉膏、蛋白胨、蒸馏水、NaCl、琼脂

(2)比例　搅拌　琼脂糊底而导致烧杯破裂

(3)高压蒸汽灭菌锅　废弃

二、微生物的分离与纯化技术

1．纯化大肠杆菌

(1)菌落的概念：由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。

(2)接种方法：最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。

Ⅰ.平板划线法

①原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散