实验1　大肠杆菌的培养和分离

　　[学考报告]

知识内容 考试属性 考情解读 大肠杆菌的培养和分离 加试 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。

3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理 　　

　　一、大肠杆菌

　　1．大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。

　　2．在肠道中，大肠杆菌一般对人无害，但也有一些菌株可以侵袭肠黏膜并产生毒素，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。

　　3．大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具。

　　二、实验内容

　　1．本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离。分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。

　　2．本实验用LB液体培养基(通用的细菌培养基)扩大培养大肠杆菌。培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上便会形成一个个单独的菌落。

　　三、细菌的培养和分离

　　1．细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20分钟分裂一次。人们在培养细菌时，一般用接种环转移带菌的培养物。接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，再操作。

　　2．细菌的分离

(1)划线分离法：在液体培养基中，只要接种后培养8 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。可用接种环蘸菌液在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此，划线到最后，可使细菌间的距离加大。在固体培养基培养10～20 h后