实验步骤

　　(1)倒平板：在60 ℃左右时，将两只三角瓶中已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基，在酒精灯旁分别倒入两个培养皿中，在水平的超净台上摇匀，平放至凝固。

　　(2)制备细菌悬浮液

　　将土样1 g，在无菌条件下加到有99 mL无菌水的三角瓶中，振荡10 min，制成10－2稀释液；从该稀释液中取0.5 mL悬液加到4.5 mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10－3稀释液；再从10－3稀释液中取0.5 mL悬液加到4.5 mL无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10－4稀释液；依此法可依次制备出10－5、10－6......土壤稀释液。

　　(3)用稀释涂布分离法分离细菌

　　取10－4和10－5的土壤稀释液各0.1 mL，分别加到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待刮刀上火焰熄灭后，在酒精灯火焰旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。

　　(4)培养：将培养皿倒置，在37 ℃恒温箱中培养24～48 h。

　　(5)观察、计数菌落：比较LB培养基与尿素培养基上的菌落数。

培养基 细菌悬浮液稀释度 10－4 10－5 对照组 LB全营养固体培养基 实验组 尿素固体培养基 　　

　　1．为什么要用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基？

　　提示：琼脂是未被纯化的混合物，内含一定的含氮化合物，用琼脂糖替代琼脂后，微生物只能以尿素为唯一氮源，利于对细菌的筛选。

　　2．有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用？

　　提示：如果土壤中有许多尿素，在自然界较高温度下会被水解，水解后的氨使土壤变成碱性，与其他阴离子形成化合物则会使土壤板结。有脲酶的细菌使植物废弃物和动物尸体降解，并利用所形成的氨，有利于自然界的氮循环。

3．有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现？