分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。

　　（二）外植体消毒

　　1．选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝。

　　2．消毒

　　①流水冲洗：菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。

　　② 酒精处理：用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动______次，持续______s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。

　　③消毒液处理：取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗______次，漂净消毒液。

　　（三）接种

　　1．接种室消毒

　　污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟。

　　2．无菌操作要求

　　操作要在____________完成，每次使用器械后，都需要__________________，接种后立即____________。

　　3．材料的切取和接种

　　4．接种注意事项

　　①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种。

　　②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜____________块，菊的茎或叶____________块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件。

　　③插入时应注意______，不要______。茎段、茎尖基部插入培养基利于______。

　　思考：应该做几组重复、设置几组对照实验？

　　答：

　　（四）培养

　　1．愈伤组织的培养

　　从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行____________。

　　2．愈伤组织的继代培养

继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间