(3)选择适于分离特定微生物的培养基：利用不同微生物代谢特性的不同，通过选择培养基选出所需要的特定微生物。

　　(4)接种：用3支无菌移液管分别吸取10－8 g/mL、10－7 g/mL、10－6 g/mL的土壤悬液各1 mL加入培养皿中，每个浓度设置3个重复，并充分振荡混合均匀，用涂布平板法进行分离。

　　(5)培养与观察：将培养皿倒置于37_℃恒温箱中培养1～2 d，观察细菌菌落。

　　(6)计数菌落：培养1～2 d后取出平板，计数，选取菌落数为30～300的一组为样本进行统计。每克土壤样品的细菌数＝某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数×稀释倍数(假定涂布所用稀释液为1 mL)。

　　2．显微镜直接计数法

　　(1)原理：此法利用特定的血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。血球计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都是由400个小格组成的。

　　(2)操作：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，用无菌毛细吸管吸取摇匀的土壤微生物培养液，在盖玻片边缘滴一小滴，让培养液通过毛细渗透作用自动进入计数室。然后在显微镜下计数4或5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。

　　(3)计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×104×稀释倍数。

　　三、阅读教材P22～23完成分离土壤中能分解纤维素的微生物

　　1．实验原理：纤维素分解菌可以分泌纤维素酶，在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能很好地生长，其他微生物则不能生长。

　　2．筛选方法：刚果红染色法。如果发现菌落周围出现透明圈，则这些菌落就是能分解纤维素的细菌形成的。

　　 判一判

　　(1)菌落是肉眼鉴别微生物不同种类的重要依据。(√)

　　(2)稀释涂布平板法的结果都可在培养基表面形成单个的菌落。(×)

　　(3)每种培养基都只适合一种微生物的特殊营养需求。(×)

　　(4)在固体培养基上形成的单个菌落即为纯培养物。(√)

　　(5)富含有机物的土壤中微生物的种类和数量少，反之则多。(×)

连一连