第3课时　微生物数量的测定

[学习导航]　1.阅读教材P17内容，概述测定某种微生物数量的方法和步骤。2.结合教材P15～17"测定土壤中微生物的数量"实验，掌握使用平板菌落计数法测定土壤中微生物的数量。

[重难点击]　1.掌握测定某种微生物数量的方法和步骤。2.学会使用平板菌落计数法测定土壤中微生物的数量。

一、微生物数量测定的方法和原理

微生物数量的测定也是重要的微生物技术之一，平板菌落计数法是一种应用广泛的微生物数量测定方法。

1.平板菌落计数法的原理：根据微生物在高度稀释的条件下，固体培养基上所形成的单个菌落，是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表一个单细胞。

2.计算方法：从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是：同一稀释度的菌落平均数÷0.2÷稀释度×10。

3.优缺点

(1)优点：能测出样品的活菌数，可用于微生物的选种与育种、分离纯化及其他方面的测定。

(2)缺点：操作烦琐、时间较长、测定值常受各种因素的影响。

4.该方法统计的菌落数比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

1.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？

答案　土壤中各种微生物的数量是不同的，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离。

2.平板菌落计数法

(1)平板菌落计数法根据操作步骤的不同可分为哪两种？

答案　①涂布平板法：用灭过菌的涂布器将一定量(一般为0.1 mL)的适当稀释过的菌液涂布在琼脂培养基的表面，然后保温培养直到菌落的出现。记录菌落的数目并换算成每毫升样品中的活细胞的数量。

②倒平板法：将已知体积(0.1～1 mL)的适当稀释过的菌液加到灭过菌的培养皿内，然后倒入溶化后冷却至45 ℃的琼脂培养基，水平晃动混匀，待凝固后保温培养到出现菌落，然后与涂布平板法同样计数。

(2)平板菌落计数法中换算样品的含菌数依据什么数据换算？