C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时

　　D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

　　[解析]　首先要进行培养基的制备、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，A正确；然后将土壤稀释液涂布于各组平板上，B正确；将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，C正确；确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，D错误。

　　8．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作，错误的是(　D　)

　　①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢

　　②接种操作要在酒精灯火焰附近进行

　　③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒

　　④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌

　　⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌

　　⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

　　A．①③ B．②④

　　C．③⑤ D．④⑥

　　[解析]　100℃煮沸5～6 min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，①正确；酒精灯火焰附近存在一个无菌区，为了无菌操作，接种操作要在酒精灯火焰附近进行，②正确；无菌繁殖脱毒苗，植物的外植体要进行消毒，③正确；葡萄制作葡萄酒利用的是附着于葡萄皮表面的野生型酵母菌，所以制作葡萄酒时葡萄不进行灭菌，以免杀死酵母菌，④错误；培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，⑤正确；指示剂和染料混有微生物，故加入培养基前需灭菌，⑥错误。所以，④⑥错误。

　　二、填空题

　　9．(2016·河南郑州二模)某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

KH2PO4 Na2HPO4 MgSO47H2O 蛋白胨 葡萄糖 尿素 琼脂 1.4 g 2.1 g 0.2 g 1.0 g 10.0 g 1.0 g 15.0 g 　　(1)根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？__不能__(填"能"或"不能")，原因是__培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物(培养基含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素)__。

(2)培养基用__高压蒸汽灭菌__方法灭菌，培养皿用__干热灭菌__方法灭菌，待培养基冷却到__50__℃(填"20"、"30"、"40"或"50")左右时，在__酒精灯火焰__附近倒平板